Луис Комфорт Тиффани родился в Нью-Йорке в семье Чарльза Льюиса Тиффани, основателя ювелирного дома Tiffany & Co. Первоначально он обучался живописи под руководством Джорджа Иннесса и Сэмюэла Колмана в США, а затем у Леона Белли в Париже. Впечатлённый путешествиями по Северной Африке и Европе, он проявил интерес к декоративно-прикладному искусству и с 1875 года начал эксперименты со стеклом в бруклинских мастерских.
В 1879 году Тиффани вместе с Кандас Уиллер, Сэмюэлом Колманом и Локвудом де Форестом основал артель Louis Comfort Tiffany and Associated American Artists. Бюро занималось проектированием мебели, текстиля, обоев и интерьеров, выполнив оформление дома Марка Твена и парадных залов Белого дома для президента Честера Артура. Позже Тиффани сосредоточился на производстве художественного стекла и в 1885 году открыл собственную компанию, переросшую к 1900 году в Tiffany Studios.
Тиффани совершил революцию в стекольном деле, запатентовав технику сборки витражей с помощью медной фольги и создав опалесцирующее стекло Favrile с иризирующим эффектом. Под его руководством работали более 300 мастеров, включая талантливых женщин-дизайнеров. После смерти отца в 1902 году он стал первым арт-директором Tiffany & Co., а его личное поместье Лорелтон-Холл на Лонг-Айленде стало главнейшей демонстрацией его интерьерного творчества.